我的生物物语——与老鼠工作的纪录 (最新：动物实验感想篇)

venus_netstorey

在进行动物实验时，某些procedure，比如说从眼球里取血，比较疼痛，因此一定要进行麻醉(anaesthesia)。

麻醉有许多办法，也有很多不同的麻醉药。看注脚的reference。

一般打小鼠我用的是Ketamine/Xylazine。麻醉药的剂量非常重要，根据老鼠的重量而定。如果打得太少的话，老鼠可能因为太疼痛而醒来，但如果打得太多，老鼠则会因为overdose而长眠不醒噢！

打麻醉针一般用IP。通常打了一两分钟后老鼠就会开始失去平衡(它们失去平衡跌跌撞撞的样子挺可爱的，呵呵)，然后再等一下子就不省人事了。如果要确保老鼠已经真的被麻醉了，就再多等一下子啦。麻醉药可以持续好几个小时的。

老鼠睡着了之后你就可以做你要做的事情了。

做好了之后如果担心老鼠还是不是活着，可以大力捏老鼠的脚趾，如果它还活着，会有reflex action把脚突然伸直的，这个反应很大，不会错过的。

一般简单的procedure不必等到老鼠醒来才离开的，当然，如果可以，一直monitor老鼠的表现就更好啦。




Venus

注：

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/AAALACAnesthAnalg.doc - 一篇很好的文章，介绍了所有的anaesthetics & analgesics。
http://research.uiowa.edu/animal/?get=aa_regimens_mice - 也介绍了各种麻醉药。

[size=78%]图片取http://www.networksplus.net/cburb/englishmicepix/mousesleepingoncheese.jpg。

venus_netstorey

单看“眼窝取血”这四个字，就会觉得恐怖了。确实是挺恐怖的，不过其实不是从眼球取的血，是眼窝里的血管，但还是很可怕的。其实取血的方法有很多中(见reference)，从眼窝取血只是其中一种，其他的比较普遍的还包括尾巴静脉(tail vein)取血、脚静脉(saphenous vein)取血、心脏取血(cardiac puncture)。

[size=78%]http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf


[size=78%]http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf

[size=78%]http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf

眼窝取血首先要麻醉老鼠。老鼠麻醉了之后就可以开始进行了。如果有助手帮忙就更好，因为这个过程一个人两只手比较难应付。

要准备的东西包括pasteur pipette或者haematocrit tubes(用来取血的)，然后还有收集血液样本的小eppendorf tubes，和纱布。

首先把取血的“武器”对准老鼠眼睛的medial canthus，然后呢，在老鼠目睽睽之下，对了，就“插”进去吧。Medial canthus是眼睛的旁边，不是眼球中间噢。当然插进去的时候不能很大力，要慢慢施力，而且轻轻转动武器。目的是要戳破里面的血管，破了之后血就会流出来，就轻轻把武器提出来一点点，这时因为capillary action血液会自动流上pasteur pipette或者haematocrit tubes里。

[size=78%]http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf

[size=78%]http://research.uiowa.edu/animal/mp5.jpg

[size=78%]http://research.uiowa.edu/animal/mp6.jpg

替小鼠取血有限制，不能取太多，不然它会失血过多。一般我取100-200microlitres已经很足够了。血取得差不多时，就要把武器交给助手，让他负责把武器中的血液放进小瓶子里，他可以用一个pipette bulb把pasteur pipette里的血液弄出来。而我自己呢，就要在这时马上拿着纱布盖住老鼠的眼睛，以止血，这个步骤非常重要。

通常按了一段短时间后就能移开，移开时用纱布让老鼠的眼皮盖着。如果过程做得好，一般不会给老鼠造成太大伤害。但是如果技巧不好，会造成老鼠失明的噢。

如果戳了很久还是没有血出来，可能是位置错了，角度错了，反正一定有东西错了就对。最重要是能很快地针对情况找到对策。因为你不可能一直不停地戳半个小时的。

以前我做这个步骤，是不替老鼠打麻醉针的，就这样用手restraint着老鼠，然后活生生这样插进去。有时候会听到老鼠疼痛而呻吟的叫声，感觉到老鼠在我的紧握之下不停尝试挣扎，弄到我的手都开始抖了，但又要镇定，不然会拖更久。所以眼球取血是我觉得最难受的行为之一，也是让我觉得自己最残忍的行为。当时我常常告诉自己，自己的行为是为了科学，为了工作，不是为了满足自己的欲望。

那时候取了血之后放开老鼠时，它已经快要奄奄一息了，也不怎么会动弹，就躺在那里，很辛苦的样子。可以想象这样的过程有多疼痛。有大概两只老鼠在这样的严重trauma下突然暴毙。我当时心里还蛮难过的。

后来终于跟上司争取到要使用麻醉针才取血。少了老鼠的挣扎和呻吟却不代表心里难受的感觉也会跟着减少。做一个研究员，心理建设还真的很重要的。

所以呢，从眼睛取窝就是这样啦，但这个过程需要不少勇气和坚定的心。有些事情不能失手，也不能重做，眼球取窝就是这样的一种事情。想想看，如果你戳了很久还不成功，老鼠已经承受了那么多的伤害，你还要三番四次尝试，这样是不是对它来说很残酷？

还是那句，胆大心细。




Venus

注：

http://www.umic.sunysb.edu/newitems/mouseblood.pdf - 很好的文章，介绍了各种取血方法。
http://www.umic.sunysb.edu/newitems/LAB1607.pdf - 详细介绍了从saphenous vein取血
http://www.ibms.sinica.edu.tw/html/sup2/tech_sup.html(中文) - 各种取血方法简介
http://research.uiowa.edu/animal/?get=mse_tech - 各种取血方法简介

毅承

我本身目前专著的领域是在gene and immunity，对于很多时候我们只能够用transgenic animals为model for trait immune response evaluation.因此，我倒觉得，用于试验方面的动物必须在尊重动物基本生存的权力下执行，这是最起码的。

你好，目前我是第2年生，正在准备着我的library research~....目前正在做着inflammatory transcription factor vs antigenic expression的题目~

venus_netstorey

原帖由 毅承 于 26-6-2007 03:38 AM 发表
我本身目前专著的领域是在gene and immunity，对于很多时候我们只能够用transgenic animals为model for trait immune response evaluation.因此，我倒觉得，用于试验方面的动物必须在尊重动物基本生存的权力下执 ...

你是学士学位二年级生？你用transgenic animals还是你produce transgenic animals? 如果你二年级然后自己produce transgenic animals，我很想知道你是哪间大学的。

对于你说要尊重动物的基本生存的话，我当然是赞同的。但事实上，很多实验都是相当残忍的，而且会造成动物病重或者身亡的。所以我的看法是，最重要是你知道你在做什么，你是为了一个目的去做的，而这个目的是有科学意义的，不是随便觉得不爽就对那些动物做些什么什么。

只要你知道自己在做什么，为了什么而做，并且知道你对动物所做的行为已经把伤害程度保持在你尽量可以执行的范围内，那，我觉得就不为过了。赞同吗？

毅承

多多指教，我是来自拉曼大学。。目前在计划使用这一类的老鼠。。基于没有animal house..可能会是collaborative research..anyway,我非常认同你提出的观点。。或许可能迟些能够进一步交流~ ^^幸会认识你~

venus_netstorey

原帖由 毅承 于 26-6-2007 12:02 PM 发表
多多指教，我是来自拉曼大学。。目前在计划使用这一类的老鼠。。基于没有animal house..可能会是collaborative research..anyway,我非常认同你提出的观点。。或许可能迟些能够进一步交流~ ^^幸会认识你~

原来如此。我还以为你自己要做transgenic，哈哈，很不容易的噢，要做transgenic or gene knockout。

在拉曼没有animal house？那你有没有实质的经验？(只是多嘴兼三八问问，呵呵)

法尔王

新加坡现在比较注重生物化学工业，好像制造业已经没有那样放重心在这方面了。

毅承

我曾在IMR待过5年，那段时间学了不少。。。因此我才敢跟我的supervisor提出这个研究题目

gene knockout不简单，因为起先要设计primer来FISH,找出基因的位置，然后还要设法knockout~目前我还在留意着antisense的技术，基本上这个技术满成熟了，虽然还有很多不确定性在里边~

venus_netstorey

动物科学实验做到某个阶段，就需要牺牲动物了。

有可能是你需要对它做的行为是terminal action，意即会造成它死亡的；或者在一定时间之后实验要停止，所以就要结束研究，也结束研究对象的生命。不管理由是什么，事实是，实验老鼠的命运就是这样。它们生下来就在实验室的笼子里长大，也会在实验室里结束生命的。当然，有一些比较幸运的，也会活到2岁多，然后自然老死---我们的老鼠就曾经有过这样的。

结束老鼠的生命有几种方法，大概如下：
1) carbon dioxide asphyxiation (二氧化碳窒息)
2) cervical dislocation (颈椎脱位)
3) decapitation (斩首)

二氧化碳和颈椎脱位我都对老鼠做过。二氧化碳比较人道，不那么疼痛。把老鼠放进紧封的容器里，然后灌入二氧化碳。大概5分钟左右老鼠就会不省人事了。它们死前会极力挣扎，也会排尿排便，但整个过程还很快的。要确保老鼠已经死过去了，也可以大力压它的脚趾，没有反射作用就代表死了。

二氧化碳箱子
[size=78%]http://www.aaronlogan.com/blog/03/02/27/CO2.jpg

二氧化碳窒息
[size=78%]http://www.aaronlogan.com/blog/03/02/27/lastmoments.jpg

颈椎脱位可以拿一枝坚硬的东西，比如一支够长的tweezer，或者干脆用手指，先用一只手抓住老鼠尾巴，然后在它的颈项的后面位置横放下你的武器或手指，用来压住老鼠的，再在后面尾巴大力拉一下。感觉到颈项位置松了就成功了。颈椎脱位一般需要经过麻醉才做，不然还蛮残忍的。通常经过颈椎脱位后，解剖了老鼠，还可以看到心脏在跳的。有时候甚至不肯定，老鼠的双眼是不是还能看到我在对它做什么。

颈椎移位
[size=78%]http://oslovet.veths.no/teaching/mouse/techniques/rederive/1a.jpg

不过说到残忍，还是斩首最残忍啦。我自己本身没有斩过别的动物，倒是听说过同学做过这事情。以前我们写论文那年，我有个同学，做跟哮喘病有关的研究，因此需要很多气管，当时她是用guinea pig的气管。听她叙述是，把动物稍微麻醉了之后，就要斩首了。断头台放在sink旁边的地方，把动物的头放置好在正确的位置，就一刀斩下去。她说，那一刻血就喷在sink里，头也会咚咚掉进去sink里去。但做研究的人不能傻眼或呆滞，还要在斩首之后马上对气管进行解剖，而且要丝毫不差，才能完好无缺地把动物的气管拿出来，并在最短的时间内对气管进行实验。

断头台
[size=78%]http://www.kentscientific.com/products/productView.asp?ProductId=6205

啊。。。现在说起来还觉得残忍，不知道当时她是怎么接受的。我只记得自己曾陪她去祈祷过几次，所以说，做科学的人内心还是有感受的。

另外，有些人要对动物进行cardiac puncture。做法是把动物弄昏迷后，然后拿一支特别大的针，就从动物的皮插进去心脏里面去，也不用解剖什么的，再把心脏里的血拿出来。这种就是terminal action，取完血了之后动物自然是活不成了。这种做的目的是为了取大量的血液(也可以说是全部的血液)，或者是研究最后一个步骤，再也不需要老鼠了。

[size=78%]http://research.uiowa.edu/animal/mp1.jpg

[size=78%]http://ihome.ust.hk/~webacf/files/Mice/mice-tech.ppt

虽然说杀老鼠这种行为他们叫做Euthanasia，翻译了是“安乐死”，但老鼠到底是不是死得安乐我就不得而知了。至于我自己手刃了多少白老鼠，也无从考究了。我只是知道，我做到已经没什么感觉了，有时候把老鼠放进去了“毒气箱”后，我看着它挣扎，看着它排泄，最后死去。。。我的脑子里却平静得很，除了实验，除了工作，也没想什么东西。偶尔在等它死的时候，会想，我真的好像没什么感觉了噢？这样是不是很糟糕呢？。。。

不知道啦。。。




Venus

注：http://research.uiowa.edu/animal/?get=euthanasia - 形容Euthanasia的不同方法

feizhu

我当初没选biomedicalscience真的是最正确的做法。之前还有股冲动想换去biomedicalscience。现在看了搂主的帖，我真的感到害怕。

venus_netstorey

原帖由 feizhu 于 5-7-2007 05:05 PM 发表
我当初没选biomedicalscience真的是最正确的做法。之前还有股冲动想换去biomedicalscience。现在看了搂主的帖，我真的感到害怕。

不是每个读biomedical science的人都要做animal work。我有同学完全没做也是这样的。有很多别的东西可以做，比如说cell culture，PCR，之类。我也有同学是很怕做animal work的，可是他们也是读biomedical science啊。

feizhu，你是男生还是女生？

feizhu

原帖由 venus_netstorey 于 5-7-2007 05:27 PM 发表


不是每个读biomedical science的人都要做animal work。我有同学完全没做也是这样的。有很多别的东西可以做，比如说cell culture，PCR，之类。我也有同学是很怕做animal work的，可是他们也是读biomedical s ...

惭愧，小弟是男的。可是我真的胆小如鼠，之前解剖老鼠还感到有点怕哪。PCR,cellculture我现在也可以学啊。嗯，除了这些和animal work。biomedical science有没有药的研究呢？

venus_netstorey

原帖由 feizhu 于 6-7-2007 02:33 AM 发表

惭愧，小弟是男的。可是我真的胆小如鼠，之前解剖老鼠还感到有点怕哪。PCR,cellculture我现在也可以学啊。嗯，除了这些和animal work。biomedical science有没有药的研究呢？

呵，不用惭愧啦，我只是随口问问。我知道有些男生也会怕的，性别虽然有一定的影响力，但不代表如果是男的就不会怕。

要怎么回答你的问题呢。。。其实我觉得你观念上有点需要修正。PCR, cell culture, animal work, 这些都是technologies/techniques，你运用这些technologies在你所要研究的东西上，或者你要开发的产品过程中。这些简单来说是“工具”，为了达到某个“目的”的工具对吧。然后你问，“药的研究”，这种叫做“目的”。所以你问我，除了animal work之外，biomedical science有没有药的研究，就好像把药物研究跟animal work放在同一个秤上。但是事实不是这样的。

animal work是一个approach，你可以用它来作各种研究，药物研究是其中之一。但是要研究开发一个药物不是只有靠animal work，你可能还需要用到cell culture techniques，或者PCR，或者western blot，或者flow cytometry，或者electron microscopy。。。生物学还有很多很多的技术，要完成一个庞大的研究是需要从多方面来进行研究的。而且，很多时候，很多研究都是一个庞大的“目的”中的冰山一角，所以你可能只需要用到一两种技术，来达到一个小的“目的”。生物研究就是由众多的小“目的”然后慢慢拼凑成一个大“目的”。

当然，如果你在一个大公司工作，你的研究部门独立可以承担一个庞大的研究的全部，但在这个“全部”之间还会要分工的，有些人做animal work，有些人做别的。你明白我的意思吗？

Biomedical Science当然有研究药物(正确来说，你的问题是不是，读biomedical science的人可以不可以去研究药物？答案是可以)。如果你是Biomedical Science毕业的，你要申请进去pharmaceutical company当然是可以的，但是读biotechnology的人也可以，或者说读biochemistry的人也可以，在工作的环境上，不是说有一种单一的工作需求是非要biomedical science的人才能做不可。

而且，不是只有读biomedical science的人要做animal work。假设一个读physiology的人，他的研究目的是要研究在脑神经里哪个receptor会扮演一个什么角色之类，他就也需要用到真的生物来做工，所以也要做animal work。

同样的，不是只有pharmaceutical company要用到animal work来进行R & D的。只要你的公司想要达到的研究目的是要通过动物研究来完成的，你就要animal work，比如说一个biotech company，它也可能要做animal work。

说了好多噢，哈哈。。。。(很长气的我)。。。。。

不要紧，如果你觉得我哪里说到不对，尽管说出来。我们大家互相讨论一下。 你还在求学，可能对于真正的学术研究和bio-related industry了解还不是很多，但可以多讨论，多了解也是好事！

feizhu

救命！谁可以告诉我agar culture和broth culture的分别。明天就要用到了。

venus_netstorey

原帖由 feizhu 于 6-7-2007 04:07 PM 发表
救命！谁可以告诉我agar culture和broth culture的分别。明天就要用到了。

如果我没有错，agar culture就是养在agar里面的,broth culture是养在liquid nutrients里的。

feizhu

原帖由 venus_netstorey 于 6-7-2007 05:25 PM 发表


如果我没有错，agar culture就是养在agar里面的,broth culture是养在liquid nutrients里的。

是的！可是这很简单而已，又没有详细点的？明天就要考了而且是两科一起考。

venus_netstorey

原帖由 feizhu 于 6-7-2007 05:35 PM 发表

是的！可是这很简单而已，又没有详细点的？明天就要考了而且是两科一起考。

sorry没有资料，你自己在网上找罗。祝考试顺利。

venus_netstorey

关于老鼠实验，写到这里，也七七八八了，也算是分享了一些比较普遍的技术。至于其他的个别技术，因人而异，而且涉及范围其实很广，也就没必要在这里多谈了。

其实除了老鼠之外，动物实验的对象还有很多，每种不同的动物都有一些不一样的实验技术，所以要掌握好个别技术，最好的办法还是实际练习！所谓practise makes perfect，是千古不变的道理啦。

至于心理建设，还是很重要的。我认为坚定的心很必要，只要坚定自己的心，就能把事情做好，也不会那么受到外来因素影响到了心情。我这里所形容的其实都是很基本的实验行为，再“残酷”再“恐怖”的还有很多。嗯。。。

最重要，是知道自己在做什么，想要达到什么，对吗？



Venus

ps：不知不觉，我停止动物实验已经快1年了，时间啊真是飞逝。问我会想念做动物实验的日子吗？我回答不出来，一个看起来很简单的问题，它的答案背后其实有许多情绪啊。

注：
http://www.amazon.com/Laboratory-Mouse-Handbook-Experimental-Animals/dp/0123364256 - 一 本讲Laboratory Mouse的书本。 http://ihome.ust.hk/~webacf/files/Mice/mice-tech.ppt - 一个网络上找到的关于老鼠实验的概括，但具体procedure因人而异，只用作reference就好。

[size=78%]图片取自http://www.petwebsite.com/mice/feeding_mouse_food.htm。

feizhu

帮帮我！！！！要如何从NCBI里找DNA sequence？我忘了步骤了。

venus_netstorey

原帖由 feizhu 于 1-8-2007 11:12 AM 发表
帮帮我！！！！要如何从NCBI里找DNA sequence？我忘了步骤了。

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/

BLAST是search for matching的，一般是你已经有了一个sequence，然后你key进去找match。你要DNA sequence BLAST的话就选nucleotide BLAST。

帮到忙吗？